环保型 GS 组织制备试剂套液是一种新型组织脱水液,因其不含甲醛、二甲苯等有害成分,是病理技术工作中理想的固定液、脱水液.本文就对不同组织的固定液效果进行分析,以验证其在病理技术中的应用价值.
1 材料与方法
1. 1 材料 随机选取我院手术室送检的新鲜标本 20 例,其中乳腺癌 8 例、子宫内膜癌 5 例、胃癌 3 例、结肠癌 2 例、淋巴瘤和肝癌各 1 例.
1. 2 方法
1. 2. 1 组织制备 分别切取肿瘤组织及瘤旁正常组织各 6份,将其切成 2 cm ×1 cm × 0. 2 cm 大小的组织块,放入包埋盒中,分别放入环保型 GS 组织制备试剂套液中的无醛固定液( 天醛组) 和 4%中性缓冲甲醛固定液( 甲醛组) 固定 1、3、7、15、30 和 60 天后,对照组进行常规脱水、透明、浸蜡和包埋,实验组用环保型 GS 组织制备试剂套液进行脱水、透明、浸蜡和包埋.统一切片.
1. 2. 2 常规 HE 染色 两组同时进行 HE 染色,采取单盲法先由 2 位初级病理医师初步比较,最后由 2 位高级职称病理医师审核.
1. 2. 3 特殊染色 两组同时对胃癌、结肠癌进行 PAS 染色,对肝癌进行 Masson 染色和网状纤维染色,检测程序同上.
1. 2. 4 免疫组化 两组同时对乳腺癌、子宫内膜癌进行 PR和 ER 检测,对乳腺癌进行 HER-2 检测,对胃癌、结肠癌进行CK8、CK18、CDX2 和 CEA 检测,对肝癌进行 AFP、CK8 和CK18 检测,对淋巴瘤进行 LCA、CD20、CD79a 和 bcl-2 检测,检测程序同上.
1. 2. 5 SISH 银染原位杂交检测 两组同时对乳腺癌进行HER2 /17 号染色体 DNA 双探针检测,检测程序同上.
1. 3 统计学分析 将实验数据输入 SPSS16. 0 统计学软件中进行处理.其中计数资料采用 χ²检验.
2 结果 见表 1.
3 讨论
目前甲醛固定法在绝大部分病理科仍然作为日常工作中的固定方法.但在保持组织形态学、保存抗原性及 DNA/RNA 等方面的性能,研究显示,环保型无醛固定液不逊色于甲醛固定液.本研究结果显示,组织固定时间在 1 ~7 天时,无醛组和甲醛组的免疫组化染色结果差异不显着( P >0. 05) ,但经过 60 天的固定后,甲醛组的免疫组化阳性结果明显劣于无醛组.另外,我们还发现,无醛组固定 1 天与固定 60 天的免疫组化结果进行比较,两组差异不显着,说明用环保型无醛固定液固定组织至 60 天或者更长,对免疫组化染色结果影响甚微.而甲醛组固定 15 天与固定 1 天染色效果差异显着( P <0. 05) ,说明甲醛固定液不适宜长时间固定组织,否则会导致抗原丢失,使免疫组化染色结果受到一定的影响.
无醛固定液与传统 4% 中性缓冲甲醛固定液处理的切片效果基本相同,组织渗透能力强,固定均匀,保持良好的组织形态学结构,保护细胞膜的完整性,有较强的固定、脱水、脱脂兼顾硬化的作用,组织收缩小,无核固缩,有效地保护组织中的抗原和核酸不被破坏、降解,DNA/RNA 保存效果好.
免疫组化检测结果显示,阳性率和阳性强度与传统组织制片法进行免疫组化检测的结果相一致,甚至更优于传统组织制片法的结果.
实验结果显示,采用环保型 GS 组织制备试剂套液进行组织脱水透明与传统的方法比较,处理的组织块软硬适中,不会产生组织脱水过度或脱水不够的现象,不易造成组织过度硬化,尤其对脂肪组织及较坚韧的组织处理效果较传统制片方法更好.
环保型 GS 组织制备试剂套液是一种无色、无毒、无异味、无刺激性的环保新型组织脱水制备液,不含甲醛、二甲苯等有害成分,对人体无伤害、对环境无污染,为建立"绿色实验室"奠定了良好的基础.采用环保型 GS 组织制备试剂制作的石蜡切片、HE 染色、组织化学染色、免疫组化染色、分子病理检测等完全可以替代传统的以甲醛、二甲苯为主体制备的石蜡切片技术流程,在病理技术中的应用价值比传统组织制备的效果要好,值得推广应用.