评估绝经期女性雌孕激素治疗后体内羰基化水平

　　女性绝经体内氧化应激反应致使心血管循环系统紊乱风险增加。目前普遍应用雌孕激素治疗来减轻或消除更年期前后临床症状。雌孕激素治疗能否影响蛋白质氧化、减缓细胞老化目前没有确切的结论，本研究评估绝经期女性，雌孕激素治疗后体内羰基化水平，为临床治疗提供依据。　　1 资料与方法　　1. 1 对象 研究对象为就诊于我院妇产科的绝经期女性，既往无血栓、高血压、糖尿病、代谢疾病等影响心血管系统的疾病，血浆 17-β-雌二醇均≤50 pg/ml 的健康绝经后女性，无吸烟史、饮酒史、甲状腺疾病、肝脏疾病。研究前未服用降胆固醇药物、抗氧化维生素制剂及影响新陈代谢的性激素药物。随机分成三组，各组受试者平均年龄、绝经时间、体重指数( BMI) 无统计学差异。见表 1。口服药物组予 17-β-雌二醇 1 mg，1 次/d，去氧孕酮 5 mg，1 次/d。经皮给药组予 17-β-雌二醇 50 μg，1 次 / d，19-炔诺酮 250 μg，1 次 / d; 对照组Ⅲ无治疗措施。本研究经胜利油田医院伦理委员会批准，征得纳入研究患同意并签署书面文件。　　1. 2 实验室检查 研究开始前例行子宫颈细胞学分析、经阴道超声评估生殖器官、乳房触诊及 X 射线等妇科检查。只有乳腺 X 线成像及细胞学检查正常的女性才可以接受激素治疗。血液检查标本采集于隔夜空腹后晨起 8: 00 ～9: 00，采血位置为肘前静脉。标本均去除血小板。本研究前储存温度为－70℃。使 用 Multifibren U-kit ( Dade-BehringDiagnostics，Warsaw，Po-land) 测定葡萄糖、17-β-雌二醇、卵泡刺激素( FSH) 、纤维蛋白原( Fg) 浓度; 使用 Baker 810 血小板计数仪测定血小板计数( PLT) ; 使用 Pathromtin SL 试剂( Dade-Behring) 测定部分活化凝血酶原时间; 血甘油三酯( TG) 水平测定在胜利油田医院检验科完成。按照 Alamdari 等报道的方法，使用-二硝基苯酚抗体试剂( Sigma-Aldrich) 通过敏感 ELISA 法测定血浆羰基化蛋白水平。　　1. 3 统计学方法 应用 SPSS13. 0 统计软件包进行分析。计量资料以 x±s 表示，组间比较采用独立样本 t 检验。　　2 结 果　　各组血清纤维蛋白原浓度有显着差异( P=0. 000) 。经治疗后雌二醇水平显着增加，而 FSH 水平在三组女性中无明显差异。激素治疗 6 个月后，其血浆蛋白羰基化水平〔口服给药组( 1. 79±0. 068) nmol/mg; 经皮给药组( 1. 81±0. 074) nmol/mg〕低于对照组〔( 2. 20±0. 107) nmol/mg〕( P=0. 000) ，但两种给药方式血浆蛋白羰基化水平没有显着差异( P=0. 326) 。见表 2。　　3 讨 论　　人体内的氧化应激反应取决于活性氧( ＲOS) 的产生与抗氧化系统清除之间的平衡。ＲOS 能够与体内各种生物分子产生反应使之失去正常功能，尤其是蛋白质分子。蛋白质分子超氧化、羟基化、过氧化、臭氧化、氧化、过氧硝酸盐化等导致蛋白质功能紊乱。氧自由基与氨基酸残基相互作用产生酮或醛衍生物统称为羰基化。羰基化蛋白质与二硝基苯肼( DNPH)诱导氧化应激反应。机体老化及多种疾病过程体内的血浆蛋白羰基化均有增加。很多神经退行性疾病与组织内抗蛋白质水解的羰基化蛋白质堆积直接相关。已经证明氧自由基激活蛋白质氧化损伤在老化过程中主要作用。多数的氧化应激研究都是通过测定蛋白的过氧化反应进行评估，并未关注血浆蛋白氧化反应。　　虽然荷尔蒙激素可以减轻绝经期症状，能够预防骨质疏松以及冠心病，但其抗氧化作用尚存在争议。雌激素的类固醇环能够有效清除羟自由基，产生羟基化产物。雌激素在体内外都能够减少 ＲOS 种类，减轻氧化应激症状。绝经后女性卵巢产生雌激素减少可导致体内氧化应激反应的增加。目前的研究部分解释了雌激素如何起到抗氧化作用，并解释了雌孕激素口服给药途径作用强于经皮给药。雌激素分子本身的化学结构特性决定了其本身具有抗氧化作用。另一方面，雌激素能够间接增加如谷胱甘肽过氧化物酶( Gpx) 和锰超氧化物歧化酶( Mn-SOD) 的活性。很多研究证实单纯口服雌激素的抗氧化作用更强。本研究也显示雌激素经口服给药途径比经皮给药途径血浆蛋白羰基化水平要低，但是没有显着的统计学差异。　　雌激素口服后经消化道吸收入肝，在肝细胞内抑制催化蛋白 1和 k-B 因子从而中和氧化应激反应。本研究中口服给药组和经皮给药两组患者均给予雌孕激素复合给药，治疗后羰基化水平降低，雌孕激素复合应用时作用明显强于单独应用。多数研究通过不同方法关注脂质氧化易感性，重点不在脂质氧化。本研究的重点关注女性荷尔蒙激素治疗后血浆蛋白质氧化应激，发现绝经后女性未经荷尔蒙激素治疗血浆蛋白质氧化应激水平高于治疗组。因此得知，绝经后女性血浆蛋白质高羰基化是因为卵巢失功能，雌激素替代疗法能够使体内氧化还原反应重新达到平衡。总之，无论通过何种给药途径，女性雌孕激素联合治疗均能减少血浆蛋白质氧化应激反应，而口服给药效果更好。　　4 参考文献　　1 Castelao JE，Gago-Dominguez M. Ｒisk factors for cardiovasculardisease inwomen: relationship to lipid peroxidation and oxidative stress〔J〕． MedHypotheses，2008; 71( 1) : 39-44.　　2 Farquhar C，Marjoribanks J，Lethaby A，et al. Long term estrogen plus pro-gestogen therapyfor perimenopausal and postmenopausal women〔J〕． Co-chrane Database Syst Ｒev，2009; ( 2) : 281.　　3 Stadtman EＲ. Protein oxidation and aging〔J 〕． Science，1992; 257:1220-4．　　4 Nowak P，Zbikowska HM，Ponczek M，et al. Different vulnerability of fi-brinogen subunits to oxidative / nitrative modifications induced by perixyni-trite: functional consequences〔J〕． Thromb Ｒes，2007; 121( 21) : 163-74.　　5 Dalle-Donne I，Ｒossi Ｒ，Giustarini D，et al. Protein carbonyl groups as bi-omarkers of oxidative stress〔J〕． Clin Chim Acta，2003; 329( 1-2) : 23-38.　　6 Alamdari DH，Kostidou E，Paletas K，et al. High sensitivity enzyme-linkedimmunosorbent assay ( ELISA) method for measuring protein carbonyl insamples with low amounts of protein〔J〕． Free Ｒadic Biol Med，2005; 39:1362-7.　　7 Paton LN，Mocatta TJ，Ｒichards AM，et al. Increased thrombin-inducedpolymerization of fibrinogen associated with high protein carbonyl levels inplasma frompatients post myocardial infarction〔J〕． Free Ｒadic Biol Med，2010; 48( 2) : 223-9.　　8 Baltacioglu E，Akalin FA，Alver A，et al. Protein carbonyl levels in serumand gingival crevicular fluid in patients with chronic peridontitis 〔J〕．Arch Oral Biol，2008; 53( 8) : 716-22.　　9 Beal MF. Oxidatively modified proteins in aging and disease〔J〕． FreeＲadic Biol Med，2002; 32( 9) : 797-803.　　10 Thibodeau PA，Kachadourian Ｒ，Lemay Ｒ，et al. In vitro pro-and antiox-idant properties of estrogens〔J〕． J Steroid Biochem Mol Biol，2002; 81( 3) : 227-36.　　11 Bednarek-Tupikowska G，Tupikowski K，Bidzinka B. Serum lipid perox-ides and total antioxidant ststus in postemenopausal women on hormonereplacement therapy〔J〕． Gynecol Endocrinol，2004; 19( 2) : 57-63.　　12 Vihma V，Vehkavaara S，Yki-Jarvinen H，et al. Differential effects of oraland transdermal estradiol treatment on circulating estradiol fatty acid es-ter concentrations in posmenopausal women〔J 〕． J Clin Endocrinol-Metab，2003; 88( 2) : 588.。　　13 Shimizu I. Impact of oestrogengs on the progression of liver disease〔J〕．Liver Int，2003; 23( 1) : 63-9.　　14 Signorelli SS，Neri S，Sciachitano S et al. Behaviour of some indicators ofoxidative stress in postmenopausal and fertile women〔J 〕． Maturitas，2006; 53( 1) : 77-82.　　15 Stetkiwicz T，PoacI，Jedrzejczyk S，et al. Antioxidant activity of estrogens〔J〕． Menopausal Ｒev，2003; 2: 19-22