活血祛瘀膏具有活血化瘀、行气通络、消肿止痛的作用,临床用于治疗急性软组织损伤、扭伤、骨伤等。方中主要药物为大黄、当归、红花、肉桂等。为控制其制剂质量,我们采用显微鉴别及薄层色谱鉴别方法,对方中的大黄、当归、红花、肉桂进行了定性鉴别研究,现报道如下。
1、 仪器与试药
仪器:万能粉碎机、显微镜、三用紫外线分析仪、电子天平、毛细管、硅板 G。
试药:活血祛瘀膏由我院制剂室提供,批号:20120306、20120409、20120511。所用中药材均购于山东菏泽泰山饮片厂,经检测鉴定均符合《中国药典》2010 年版规定。大黄、当归、红花、桂皮醛对照品均为中国药品生物制品鉴定所提供。食用植物油,其余试剂均为分析纯。
2、 制备工艺
2.1 处方:活血祛瘀膏由大黄、三棱、莪术、土鳖虫、川芎、当归、红花、乳香、没药、肉桂、海马、血竭、甘草等十三味中药和黑药肉组成。
2.2 制备方法:以上十三味中药粉碎过 120 目筛,备用,然后将炼好的基质置入锅内加热熔化至 70℃,再分次放入粉碎后的药粉,每次需搅拌均匀再投下次料,先少量后大量。药物搅拌均匀后,放入水中拔毒,从水池中取出膏药药块揉团,制成 75g/块,待包装。
2.3 工艺流程图:将处方中的原料→配料→粉碎→过筛→混合均匀→投入熔炼好的基质中→搅拌均匀→水中拔毒→搓成条→制成块状→包装→成品入库3、 质量标准。
[性 状]本品应乌黑光亮,油润。
[检 查]重量差异,取供试品 5 袋,分别称定重量与标示量相比较不得超出±5%。(应符合中国药典 2010 版膏药项下的有关的各项规定)[质量要求]
(1)外观要求:膏药外观应色泽一致,油润细腻,摊涂均匀。
(2)刺激性:对皮肤无刺激性。
(3)重量差异:不得超过±5%。
(4)粘度要求:加温后能粘贴于皮肤上,不脱落也不移动。
[定性鉴别]
3.1 显微鉴别:草酸钙簇晶多,大型,掌叶大黄草酸钙簇晶棱角大多短钝;单粒类球形或多角圆形淀粉粒,脐点呈星状;导管多为大型网纹(大黄)。粉末橙黄色,长管状分泌细胞,花粉粒类;柱头及花柱上部表皮细胞分化成圆锥形单细胞毛,先端较尖;花冠顶端表皮细胞外壁突起呈短绒毛状(红花)。表面黄棕色或棕褐色,有纵皱纹及横长皮孔;有棕色油点,形成层呈黄棕色环状,木部色较淡,有棕色放射状纹理(当归)。纤维大多单个散在,木栓细胞多角形,含红棕色物(肉桂)。
3.2 薄层色谱鉴别
3.2.1 大黄的薄层色谱鉴别:取本品 6.0g,加甲醇 40mL,超声处理15min,滤过,取上清液作为供试品溶液。另取大黄对照药材 0.2g,同法制成对照药材溶液。按处方工艺去掉大黄制成样品,按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述三种溶液各 6μL、分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以石油醚(30℃~60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶2)的上清溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,在供试品色谱中,与对照药材色谱相应的位置上,显相同橙色斑点。置氨蒸气中熏后,斑点变为红色,阴性样品溶液无相应的斑点,见图 1。
3.2.2 红花的薄层色谱鉴别:取本品粉末 5.0g,加 80%丙酮溶液30mL,密塞,振摇 15min,静置,取上清液作为供试品溶液。取红花对照药材 0.3g,同法制成对照药材溶液。另取缺少红花的制剂 5.0g,同法制成缺少红花的阴性对照液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述三种溶液各 8μL,分别点于同一硅胶 H 薄层板上,以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(6∶1∶2∶0.3)为展开剂,展开,取出,晾干。在供试品色谱中,与对照药材色谱相应的位置上,显示相同颜色的斑点。
阴性样品溶液无相应的斑点,见图 2。
3.2.3 当归的薄层色谱鉴别:取本品粉末 4.0g,加乙醚 20mL,超声处理 15min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇 1mL 使溶解,作为供试品溶液。取当归对照药材 0.2g,同法制成对照药材溶液。另取缺少当归的制剂 4.0g,同法制成缺少当归的阴性对照液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述三种溶液各 8μl,分别点于同一硅胶 G薄层板上,以正己烷-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性样品溶液无相应的斑点,见图 3。
3.2.4 肉桂的薄层鉴别:取本品 15g,研细,加乙醚 40mL 超声处理15min,滤过,滤液低温挥干,残渣加无水乙醇 1mL 溶解,作为供试品溶液。取桂皮醛对照品,加无水乙醇制成 1μl/mL 的溶液,作为对照品溶液。取缺肉桂药材的样品,按供试品溶液的制备方法,制成阴性对照溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述三种溶液各 5μL,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以石油醚(60℃~90℃)-乙酸乙酯(15∶3)为展开剂,展开 12cm,取出,晾干,喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同橙黄色斑点。阴性对照液色谱无此斑点。见图 4。
4、 讨 论
4.1 活血祛瘀膏是由 13 味中草药用食用植物油与其他基质炼制而成的黑膏药,具有活血祛瘀,行气通络、消肿止痛的作用。方中大黄活血祛瘀,清热凉血为君药;当归、红花活血化瘀、养血活血,肉桂舒经通络为臣。以上四味中药在方中均为重要药味,因此对大黄、当归、红花、肉桂进行了显微鉴别及薄层色谱鉴别,作为质量控制标准,经三批产品测定,方法可行。
4.2 通过实验,确定了活血祛瘀膏中大黄、当归、红花、肉桂的薄层色谱方法,阴性对照表明其他成分对本法无干扰,证明该方法专属性强,操作简便,重复性好,可作为该制剂的定性指标。
4.3 活血祛瘀膏广泛用于我院骨伤科,用本法制备的黑膏药,治疗急性软组织损伤疗效显著、确切,对皮肤无刺激性,无过敏现象,值得进一步推广应用。
参考文献: [1]国家药典委员会.中国药典[S].北京:中国医药科技出版社,2010:124. [2]周海燕,常新全,赵润怀,等.七厘胶囊中红花和儿茶的薄层色谱鉴别[J].中国现代中药,2009,11(2):32. [3]康延国.中成药薄层色谱鉴别[M].北京:人民卫生出版社,1995:30-35.