鸦胆子(Brucea javanica(L.)Merr.)为苦木科植物鸦胆子的干燥成熟果实,别名老鸦胆、鸭蛋子、雅旦子。其苦,寒,有小毒,归大肠经、肝经,在中医临床上常用来清热解毒、止痢截疟。现代研究表明其有广谱抗肿瘤作用,临床上常作为介入药物或联合化疗药物,对肝癌、胃癌等多种癌症有较好的治疗作用。
本文自制的鸦胆子油乳注射液是从中药鸦胆子中提取并分离得到的脂肪油经过精制,去毒,纯化,乳化后制成的中药注射剂,主要成分为不饱和脂肪酸混合物。
1 材料与试剂
1.1 材料:Lewis 肺癌细胞株,由中科院上海细胞库提供。
SPF 级 KM 小鼠,雌雄各半,8~12 周龄,平均体重 18~22g,由广州中医药大学动物实验中心提供。
SW-CJ-IF 超净工作台,苏州安泰;TG16-WS 台式高速离心机,长沙湘仪;显微镜,OLYMPUS;5% CO2培养箱,Thermo Scientific。
1.2 药品与试剂:自制鸦胆子油乳注射液,从中药鸦胆子中提取并分离得到的脂肪油经过精制,去毒,纯化,乳化后制成。
注射用顺铂,生物谷制药,10mg 规格,生理盐水稀释成0.2mg·ml-1。生理盐水,四川科伦;胎牛血清,浙江天抗,优级;DME 培养基、胰蛋白酶,美国 GIBCO 公司。
2 方法与结果
2.1 Lewis 肺癌模型建立:按常规培养方法,Lewis 肺癌细胞置于胎牛血清与 DME(胎牛血清 10%)的完全培养液中,置于恒温培养箱(37℃,湿度饱和,CO25%)中,每 1~3d 经胰蛋白酶消化传代,达到要求后,测定活细胞数大于 95%,调节细胞浓度 1×107·ml-1,制成单细胞悬液备用。
选取 80 只传代 5~7d,生长状况良好的小鼠,雌雄各半,各取 0.2ml 细胞悬液接种于右侧腋后皮下,观察肿瘤生长,建立肺癌 Lewis 小鼠模型。
2.2 分组及处理:小鼠造模后,随机分成 4 组,每组 20 只。生理盐水组:0.1ml/d,腹腔注射。顺铂组:1mg·Kg-1/d,腹腔注射。鸦胆子油乳低剂量组:4ml·Kg-1/d,腹腔注射。鸦胆子油乳高剂量组:
8ml·Kg-1/d,腹腔注射。各组均连续给药 10d,末次给药 24h 后,称取小鼠体重,颈椎脱臼处死小鼠。剥取并清洁瘤块,精密称取质量,计算肿瘤生长抑制率(%)。
肿瘤生长抑制率(%)=(生理盐水组平均瘤重—给药组平均瘤重)/生理盐水组平均瘤重×100%2.3 结果:各组肺癌 Lewis 小鼠瘤重及肿瘤生长抑制率见下表。【表1】 3 讨 论
表 1 结果显示,与生理盐水组比较,各给药组肿瘤生长抑制率均明显增高,均具有显着差异。鸦胆子油乳高剂量组肿瘤生长抑制率较低剂量组高。说明鸦胆子油乳注射液对于肺癌Lewis 小鼠有明显治疗作用,其作用机理下一步将深入研究。
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