摘 要：从五倍子、鱼藤粉、苦楝素3种药物中筛选可以有效抑制水霉菌丝生长的药物。采用12孔细胞培养板，3 mL培养体系药物浓度梯度液体培养法培养水霉，判断各种药物对水霉菌丝是否有抑制作用。结果发现：五倍子的抑菌效果最好，其最小抑菌浓度为250 mg/L;而鱼藤粉、苦楝素单独用药对水霉菌无效，但其分别与五倍子按2：1比例联合用药时，有一定的抑菌效果。结论得出：五倍子无论是单独用药还是联合用药，都有较好的抗水霉菌效果，五倍子在未来的抗水霉药物研发中有较大的应用潜力，可用于水霉病的防控及治疗。
关键词：多鳞铲颌鱼; 药物筛选; 五倍子; 防治
多鳞铲颌鱼(Onychostoma macrolepis)又称赤鳞鱼、梢白甲、钱鱼、石口鱼(见图1)，属于鲤形目鲤科鲃亚科白甲鱼属，是生活在山涧水溪中的珍稀小型濒危鱼类[1]。多鳞铲颌鱼与春江鲥鱼、青海裸鲤、大理裂腹鱼和异华鲮并称为“中国五大名鱼”[2]。该鱼肉嫩味鲜，体内含有12种以上的矿物质、多种微量元素及18种以上的氨基酸，具有很高的营养价值和食用价值[2]。 图1 人工驯养的多鳞铲颌鱼
近年来由于生态环境的破坏、过度捕捞、水域生态污染等诸多原因，多鳞铲颌鱼的栖息环境遭到了严重破坏，多鳞铲颌鱼的数量越来越少，已经列入国家Ⅱ级保护动物、濒危鱼种。为了保护这一珍稀的鱼类资源，我国已经逐步开展了多鳞铲颌鱼的人工驯养及繁育工作，并在北京地区繁殖成功[3]。
水霉病是多鳞铲颌鱼人工养殖过程中的高发病之一，该病一年四季均可发生，以早春、晚冬最为流行，各阶段鱼类均可感染发病[4，5]。该病通常感染体表受伤组织及鱼卵，形成灰白色絮状覆盖物，故又称肤霉病或白毛病。水霉对温度适应范围很广，对水生动物种类没有选择性，凡受伤的鱼体和卵均可被感染致病[6]。水霉孢子经由水而传播各处，常会带来严重的经济损失。
1 水霉病的病原
水霉病的病原是水霉属、绵霉属的水霉菌，见图2。
图2 人工培养的水霉菌菌丝(左图)和水霉孢子(200×，右图)
2 水霉病的症状
霉菌感染早期肉眼看不出症状。当肉眼能看见时，菌丝已深入肌肉，蔓延扩散，向外生长成棉毛状菌丝，似灰白色棉毛，所以又称白毛病(见图3)。有的水霉外生灰色菌丝，犹如旧棉絮覆盖在体表，病鱼体表黏液增多。有时菌丝着生处有伤口充血或溃烂。病鱼行动迟缓，食欲减退，离群独游，最后衰竭死亡。
图3 染水霉菌死亡的多鳞铲颌鱼
2 水霉病的药物筛选
2.1 水霉菌的培养 从自然养殖条件下患水霉病的鱼体分离水霉菌，挑取少量菌丝接种于无菌马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)上，20 ℃恒温培养，直至水霉菌丝长满整个平板，4 ℃冰箱保存备用。
2.2 药物筛选 在长满霉菌的PDA培养基菌落边缘用直径为6 mm的打孔器取菌丝块，接种到24孔板中，每孔放3个菌丝块，即每个处理3个平行对照，然后加入3 mL不同浓度的药物，同时设对照组(3 mL蒸馏水)。在20 ℃培养24 h后，将菌丝琼脂块用灭菌蒸馏水漂洗数次，再接种到新鲜的PDA培养基中，25 ℃培养24 h后观察菌丝是否生长，将菌丝不生长的药物浓度定为对水霉菌丝生长的MIC值。
图4 水霉病的药物筛选：鱼藤粉(左)，五倍子(中)，苦楝素(右)。
2.3 药物筛选结果 结果发现五倍子的抑菌效果最好，最小抑菌浓度为250 mg/L;而鱼藤粉、苦楝素单独用药对水霉菌无效(见图4)。但其分别与五倍子联合用药(配伍比例为1：2)时，有一定的抑菌效果。
3 防治方法
3.1 预防方法
1)鱼池/缸使用前，可用高猛酸钾或聚合碘进行清洗消毒。高猛酸钾可用1:5 000的浓度采用循环水消毒1 d，把水全部放掉，彻底清洗干净后，晾干备用。用科威碘消毒时按1:600浓度稀释后全池泼洒消毒。
2)鱼苗在捕捞、运输时防止体表受伤;鱼苗下池前用3.0%氯化钠溶液浸泡消毒30 min，可预防水霉病的发生。
3)定期检测水质，防止水体污染。水质较差时，可用EM原菌粉改良水质。保持水中溶氧浓度在6.00～10.00 mg/L，氨氮水平在0.20～0.40 mg/L，PH值在6.50～7.50左右，优良的水质可降低各种疫病的发生风险。
3.2 治疗方法
1)根据药物筛选结果可用五倍子进行治疗。每立方米水体用五倍子250 g，加2.5 L水煎煮30 min后，水中泼洒，2次/d，连用7 d。五倍子亦可与鱼藤、苦楝分别与按2：1的比例进行联合用药，可起到较好的抑效果。
2)可尝试用防霉剂—泥泊金乙酯进行治疗。泥泊金乙酯用75.0%的乙醇稀释至0.5%的浓度，然后在小水体中按1：30的比例浸泡鱼体20 min后转入干净的清水中，2次/d，连用1周。
3)100 kg水中溶解0.25 g亚甲基蓝，浸洗鱼体30 min，3～5 d后可见菌丝脱落。同时料中拌维生素E，用量为0.8 g/10 kg鱼体重，连用1周，提高机体抵抗力。
5 结语
水霉病是淡水鱼类养殖中最常见的真菌性疾病，对宿主没有严格的选择性，几乎所有的水产养殖动物都可感染，常常给鱼类养殖带来毁灭性灾害。自孔雀石绿被禁用以后，生产上一直缺乏安全、高效的水霉病治疗药物。近年来，不少